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WIWAM高通量植物表型組學成像平臺—擬南芥赤霉素研究

更新時間:2022-05-25 點擊量:1418

WIWAM高通量植物表型成像系統(tǒng)由比利時SMO公司與Ghent大學VIB研究所研制生產(chǎn),整合了LED植物智能培養(yǎng)、自動 化控制系統(tǒng)、葉綠素熒光成像測量分析、植物熱成像分析、植物近紅外成像分析、植物高光譜分析、植物多光譜分 析、植物CT斷層掃描分析、自動條碼識別管理、RGB真彩3D成像等多項*技術(shù),以較優(yōu)化的方式實現(xiàn)大量植物樣 品——從擬南芥、玉米到各種其它植物的生理生態(tài)與形態(tài)結(jié)構(gòu)成像分析,用于高通量植物表型成像分析測量、植 物脅迫響應(yīng)成像分析測量、植物生長分析測量、生態(tài)毒理學研究、性狀識別及植物生理生態(tài)分析研究等。

稱重、成像、澆水植物表型成像系統(tǒng)

室內(nèi)植物表型成像系統(tǒng)WIWAM Line

夜間赤霉素生物合成受波動的環(huán)境條件影響,并有助于擬南芥葉片的生長調(diào)節(jié)

最佳植物生長性能要求生長信號(如赤霉素(GA))的作用與光同化物的可用性相協(xié)調(diào)。在這里,我們研究了赤霉素生物合成和碳可用性之間的聯(lián)系,以及隨后對生長的影響。結(jié)果表明,碳的有效性、光和暗信號以及時鐘確保了赤霉素生物合成的時間和幅度,并且這些機制的破壞導致赤霉素水平和下游基因表達的降低。赤霉素3β-雙加氧酶1(GA3ox1)的碳依賴性夜間誘導在一天的光照可用性降低之前受到嚴重阻礙,特別是導致生物活GA4水平降低,并與夜間葉片擴張率下降相一致。我們將這種葉片擴張的下降主要歸因于光同化物的減少。然而赤霉素限制得到緩解的植物顯著改善了擴張,這表明在不同碳可用性下赤霉素在生長控制中的相關(guān)性。在短時間內(nèi),上游赤霉素生物合成基因的碳依賴性表達未轉(zhuǎn)化為代謝產(chǎn)物變化。我們提出了一個模型,其中GA3ox1夜間生物合成生物活性GA4的程度由作為夜間碳源的淀粉決定,從而提供赤霉素反應(yīng)的日常調(diào)節(jié)。 

GA生物合成的幾個酶步驟由多基因家族編碼。為了確定營養(yǎng)生長期間具有相對高表達的關(guān)鍵家族成員,研究了兩個公開的微陣列數(shù)據(jù)集,它們跟蹤成年擬南芥花環(huán)中48小時的轉(zhuǎn)錄豐度(20-21)。進一步表明調(diào)節(jié)生長控制的作用是基于晝夜周期的振蕩行為,表明對碳供應(yīng)、光信號或時鐘變化的反應(yīng)。這些數(shù)據(jù)指出海藻氨酸合酶(KS)、GA20ox1和GA3ox1是主要候選基因(圖1)。


圖1.節(jié)律性GA生物合成基因的基因家族成員在晝夜循環(huán)中的 mRNA豐度

盡管赤霉素前體池(GA9、GA19和GA20)在晚上似乎更高,但在時間點之間和光照水平之間未觀察到顯著差異(圖2A)。生物活性赤霉素對受體GID1的親和力不同,與GA4的強結(jié)合親和力相比,GA3和GA1的親和力較弱。低親和力生物活性赤霉素(GA1和GA3)在處理之間沒有明顯差異。高親和力赤霉素GA4是豐富的生物活性赤霉素,在夜間濃度最高(圖2B)。延長一天的夜間GA3ox1誘導減少,導致第二天早上GA4下降(圖2B)。低光照水平導致第二天早上GA4的下降更大,而GA4水平在實際弱光日結(jié)束時保持不變(圖2B)。這些結(jié)果表明,夜間GA3ox1表達在確定響應(yīng)弱光的生物活性GA水平方面起著重要作用,而KS和GA20ox1的下降并沒有在本文研究的時間范圍內(nèi)轉(zhuǎn)化為赤霉素生物合成的減少。赤霉素滅活酶也可在確定生物活性GA的動力學方面發(fā)揮作用。但是,未發(fā)現(xiàn)滅活氣體(GA8、GA29和GA34)的一致變化。

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圖2.GA豐度和隨時間和弱光條件后的響應(yīng)

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圖3.日膨脹變化情況

pgm中GA響應(yīng)基因的節(jié)律性表達丟失,盡管GID1A中保持節(jié)律性。在赤霉素不敏感(gai)和della pentuple(pent)突變體中,赤霉素在一天特定時間葉片擴展中的相關(guān)性得到了進一步研究,這兩種突變體不能對不同的赤霉素水平作出反應(yīng)。當GA3ox1的表達決定生物活性GA水平時,gai和pent的擴增率在夜間降低(圖3)。另外。早上擴張率升高(圖3),這可能代表了一種獨立于GA的行為,可能利用了未開發(fā)的夜間增長潛力。同樣,GA3ox1基因敲除突變體GA3ox1-3也減少了夜間擴張,增加了早晨擴張(圖3)??偟膩碚f,這表明對赤霉素水平和GA生物合成的變化作出反應(yīng)的能力有助于一天中特定時間的擴張。

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圖4.恒定和可變條件下的碳和GA依賴性生長

利用自動表型分析平臺WIWAM XY精確控制土壤含水量,并隨時間對單個植物進行成像,跟蹤了恒定晝夜周期下以及面對四個散布的弱光日時Col-0和ga3ox1 kd植物的膨脹率(圖4C)。為了獲得正常光照下的膨脹率,并確定弱光介導的膨脹減少,對單個植物的生長曲線進行了擬合。在對照條件下,Col-0和ga3ox1 kd之間的膨脹率幾乎相同(圖4D)。得出結(jié)論,赤霉素水平的GA3ox1依賴性波動不能成為正常光照條件下GA3ox1生長的主要驅(qū)動因素。暴露于四個弱光日導致兩種基因型的最終花環(huán)面積顯著減少,這意味著幾天的弱光日可以產(chǎn)生顯著的影響。對弱光白天和隨后夜晚膨脹減少的量化表明ga3ox1 kd的膨脹率降低幅度小于Col-0(圖4E)。這表明ga3ox1 kd在夜間表達和調(diào)節(jié)可忽略不計的情況下(圖4A-B)的擴增不會像野生型那樣受到弱光的強烈影響,在野生型中弱光嚴重抑制了ga3ox1和GA4水平的表達。

為了調(diào)查生長減少發(fā)生的確切時間,并進一步探索GA3ox1在這種減少中的作用,每隔6或12小時跟蹤生長最快的葉片的葉片擴展率。在弱光處理期間,葉片膨脹率保持不變,而在隨后的夜間,膨脹率嚴重降低(圖4F)。通過應(yīng)用赤霉素或ga3ox1 kd防止弱光后GA4的下降,可在類似程度上緩解膨脹的減少(圖4G)。然而,對赤霉素的操縱都不能*消除生長懲罰(圖4G)。

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